实验原理

细胞划痕法是测定细胞迁移运动与修复能力的常用方法，类似体外伤口愈合模型，故又称伤口愈合法。在体外将细胞培养在培养皿或平板上，当细胞长到融合成单层状态时，用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为"划痕"。然后继续培养细胞，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使"划痕"愈合，每间隔一段时间（如间隔12小时），显微镜下拍照，记录细胞向中央空白区迁移情况，以此判断细胞的迁移能力。

方法和步骤

①在24孔板中分别接种8×10E4个细胞，常规条件培养，直至形成细胞单层。

②在单层细胞上，用10 μl规格的枪头沿培养板底部呈"一"字形划痕，用PBS清洗掉悬浮的细胞，清洗两次，加无血清培养液继续培养，同时拍照，记录划痕区域的相对距离。

③分别在12、24、36小时更换新鲜的无血清培养基，观察并拍照，记录各个时间点划痕区域的相对距离。

④测量迁移距离：用相关软件测量各个时间点同一区域的划痕距离，计算细胞实际迁移距离。

注意事项

（1）确保培养板内细胞为单细胞层。

（2）划痕时注意保持划痕区域边缘的平整。

（3）划痕时保持不同分组间划痕区域距离的一致性。

（4）不同细胞的迁移速度不同。

文章出自：细胞实验外包    想了解更多请关注：http://www.do-gene.com