一、试剂耗材:

小鼠(8-10周龄)、玻璃皿(用于解剖小鼠)、培养皿(塑料、DC在光滑皿中可转化良好，所以最好使用一次性塑料培养皿)、剪刀、镊子、纱布、细胞培养液、GKN缓冲液、吸管、离心管(50ml，饭盒中多100ml)、锡箔纸、1ml注射器。

二、实验步骤:

1.将小鼠的四肢切除(最后两肢最好)，分离附着在骨骼上的肌肉、血管和皮肤(用纱布反复摩擦)，使骨骼及其附着的关节完全暴露。小心不要弄断关节。将腿骨切成三段，分别是小腿骨、关节和大腿骨；

2.用1ml注射器吸GKN(1640也可以，但费用较高)，冲洗骨髓至骨头完全变白，吹入两个离心管，方便离心整平；

3.1000转离心5分钟，倒出上清液，然后用1640挂，再次离心，倒出上清液；

4.加入细胞培养基，重新悬浮骨髓细胞。将一只小鼠分成四个培养皿，重悬细胞总量尽量保持在4ml；

5.细胞至于培养皿，补充培养基。即1ml细胞+4ml培养液；

6.加入细胞因子、IL-4和GM-CSF转化成DC。用锡箔纸包好，放入培养箱避光，轻拿轻放，不要摇晃；

7.第三天(之前不要取出)，加入等量的培养基，即4ml，加入相应量的细胞因子。8.第6 ~ 7天，骨髓细胞可转化为树突状细胞(显微镜下)。

细胞的原代培养必须在工作区域保持无菌和清洁。先用紫外线灯消毒1h，手术前用75%乙醇消毒，穿上实验衣，戴上口罩和帽子，手术时不要大声喧哗。双手戴上一次性橡胶手套。整个无菌操作都要在酒精灯周围进行。

文章出自：细胞实验外包   想了解更多请关注：http://www.do-gene.com