提起Western blot (WB)，很多人都能哭诉半宿。这是一个基础实验，也是一个让大家头疼的实验，简称“玄学”。“我明明按照操作步骤来，为什么就是跑不出？”“为什么我的 WB 总是跑得不干净？”，做过的都懂。话不多说，让微扑克wepoker下载了解下WB。
什么是WB？
ABOUT WB
Western Blot，也就是微扑克wepoker下载通常所说的“WB”，中文名称是“蛋白印迹”或“免疫印迹”，其核心本质是抗原抗体的特异性反应。是一种被广泛应用并得到公认的技术，用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。
这一技术利用抗体与特定待检测蛋白的结合，测定生物样本中的蛋白水平。抗体与其靶点蛋白表位的精确结合可用于检测蛋白质中具有高度特异性的氨基酸序列。
一句话讲完WB：就是抗原抗体反应！
WB涉及领域
ABOUT WB
从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；
定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；
用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。
WB实验步骤
ABOUT WB
WB结果图
ABOUT WB
了解文献中出现的WB结果图，微扑克wepoker下载得先理解两个概念：
内部参照
内参（Loading control）：即内部参照，类似于荧光定量实验的内参基因，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由看家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在不同组织和细胞中的表达相对恒定，常用它作为检测目的蛋白表达水平变化时来做参照物。
内参的作用是什么？
校正蛋白样品定量以及上样过程中的误差，保证实验结果的准确性；
作为空白对照，检测WB过程中蛋白转膜是否完全以及发光显色体系是否正常。
内参的选择也是一门学问，选对了内参，实验也成功了一半。
灰度值
灰度值说白了就是看这个条带有多黑，因为跑出来的WB条带只有一种颜色，可以给微扑克wepoker下载提供的信息也只有黑色的深浅，所以这是微扑克wepoker下载分析条带的关键。
条带越黑说明目的蛋白越多，但是微扑克wepoker下载不能只通过观察条带的深浅来判断实验处理对蛋白表达造成了什么影响，这种判断是存在误差的，误差来源于微扑克wepoker下载上样的时候并不能保证每个加样孔的上样量都一样。
这时候就需要对 WB 的结果条带的灰度值进行计算并做统计分析——目的蛋白的灰度值除以内参的灰度值，以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量，这样得到的结果才更加准确、更有说服力。
常用的灰度值分析软件有Image J、QuantityOne、Bandscan、Gel-ProAnalyzer、TanonImage等。
了解了内参、灰度值这两个概念，WB结果图（上图）表达的意义就一目了然。
分析可得，p-Vav1蛋白的表达量对照组（control）要低于糖尿病组（diabetes），因为对照组条带较淡，右侧的柱状图——灰度值统计分析也印证了微扑克wepoker下载的初步猜想，其蛋白含量的差异具有统计学意义。Vav2、Vav3条带的对比相对来说没有那么明显，灰度值统计分析后显示无差异。
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