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茜素红染色

茜素红染色是一种常用的染色方法,以下是关于它的详细介绍:原理茜素红(Alizarin Red S)是一种蒽醌衍生物,能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物,从而用于体外检测组织切片或者培养细胞的钙质变化操作步骤以干细胞成骨诱导茜素红染色为例:吸去培养基并洗涤:在成骨诱导分化结束后,吸去六孔板中的成骨诱导分

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茜素红染色是一种常用的染色方法,以下是关于它的详细介绍:


原理

茜素红(Alizarin Red S)是一种蒽醌衍生物,能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物,从而用于体外检测组织切片或者培养细胞的钙质变化


操作步骤

以干细胞成骨诱导茜素红染色为例:


吸去培养基并洗涤:在成骨诱导分化结束后,吸去六孔板中的成骨诱导分化完全培养基,用 1×PBS 轻柔洗涤 2-3 次,去除培养基中的成分,为后续的固定和染色做准备。

固定:每孔加入 2mL 4% 多聚甲醛溶液(或 10% 福尔马林),室温固定 30min,以保持细胞形态和结构。

洗涤:吸去固定液,用 1×PBS 轻柔洗涤 2-3 次,确保将固定液清洗彻底,避免对后续染色结果产生干扰。

染色:每孔加入 2mL 茜素红工作液,室温染色 5-10min,具体染色时间需根据镜下可见的聚集钙结节情况来确定,不能仅以诱导时间决定。

洗涤:吸去茜素红染色液,用 1×PBS 轻柔洗涤 2-3 次,充分洗去多余染色液,以获得清晰的染色结果。

观察:每孔加入 2mL 1×PBS,将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果,评估成骨组织的形态和钙化区域的分布。

封装和保存:染色后的六孔板用封口膜封装,置于 4℃可保存 2 周,保持染色结果的稳定性和样本的完整性。



 
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