小鼠脑立体定位注射方法

1. 首先，了解小鼠脑部结构的大概位置，在这里，微扑克wepoker下载主要讲述侧脑室和海马区域的位置，应用比较广泛。

侧脑室的位置，如图显示的是比较容易注射的位置

Interaural 耳间 3.58 mm—3.22 mm

Bregma 前卤 -0.22 mm-- -0.58 mm

最佳的位置为

X= 1.00 mm

Z= 1.5 mm

Lateral 横向距离，0.60 mm-2.16 mm，最佳位置为0.80 mm

Y= 0.80 mm。

最终决定皮层区域的最佳位置

X=1.00 mm, Y= 0.80 mm, Z= 1.5 mm

海马区域

Interaural 2.58 mm—1.50 mm

Bregma -1.22 mm-- -2.30 mm

前卤 (Bregma)

海马区域最佳位置，X=1.5 mm, Y= 2.0 mm, Z=2.0 mm。

实验步骤

1. 利用某些颅骨外面的标志(如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝等)或其它参考点所规定的三维坐标系统，来确定皮层下某些神经核团结构的位置.

注意：操作为大鼠上门齿卡入横杆，调节旋钮压紧鼻杆；将耳杆插入大鼠耳道，平衡调节左、右耳杆，使大鼠两耳间连线与耳杆在同一直线上，保证左、右耳杆的刻度位置相同后调节旋钮锁紧耳杆。大鼠固定完好的判断标准：鼻对正中，头部不动，提尾不掉，目测大脑放置水平（使颅骨水平）。

2. 前囟点即Bregma点，位于冠状缝和矢状缝的交接处，以其作为颅骨三维坐标系统原点O。

3. Bregma点定位过程大体分为: 选定脑部靠中间的位置。剪除大鼠顶被毛后，用碘酒或酒精消毒，纵向切开头皮，用止血钳将皮肤左右分开，用刀片刮去颅盖骨膜，或用双氧水腐蚀头盖骨膜，彻底去除骨膜后让Bregma点显现出来。用脑定位仪读取Bregma点数值作为三维坐标原点O。

4. 侧脑室位置的定位，以眼间连线的中点为起点，垂直于眼间连线后移3-4 mm，然后侧移1.1 mm左右，向下3 mm左右，即进入侧脑室。

具体的位置依据小鼠的脑大小确定，坐标值，即ML值（X轴）、AP值（Y轴）、DV值（Z轴）。侧脑室位置为前囟点旁开1.5 mm，向后囟方向1.1 mm，深2.0 mm（坐标即为±1.5，-1.1，-4.5）。调节X轴（1.5个单位）及Y轴（1.1个单位）旋钮移动操作臂到坐标位置。

海马区域的位置，X= 1.5 mm, Y = 2 mm, Z= 1.5 mm。

5. 10ul的微量注射器，注射剂量是2ul（两侧注射，各1 ul）,打药时间2 min左右，打药之后再停留2 min，然后慢慢的拔出注射器针头。

注意事项：

1、实验鼠术前需要禁食，否则易引起大鼠腹胀气。

2、注射0.2ｍＬ1%戊巴比妥钠麻醉小鼠

3、如果使用钻头钻孔时，注意途中用棉签沾PBS涂抹进行降温，不要伤及硬脑膜。

4、注射完成后，一般需要留针2-5min（让药液充分吸收）后方可退出针头。

5. 注射器用PBS冲洗微量注射器(5μl规格)3-5次。

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